大多数ICC 和IHC染色方法都是基于二级抗体的使用上。然而,二级抗体可能会与组织中内源免疫球蛋白发生交叉反应,或者通过二级抗体的非特异性结合产生假阳性染色。在多路复用实验中,物种特异性二级抗体可能会与源于不同物种的初级抗体发生交叉反应。使用不仅预先吸附了待染色物种的免疫球蛋白,而且还吸附了其它一级抗体宿主物种的免疫球蛋白的二级抗体。
Synaptic Systems建议在染色方案中省略初级抗体,对每个待染色的样品进行二级系统对照。此对照可针对二级系统中的假阳性染色。
Synaptic Systems提供一个基于纳米抗体的二级试剂小组,可提供卓越的物种特异性。由于它们是用一个已定义的序列重组制成,所以它们显示卓越的批次间一致性。
NanoTag's FluoTag® 物种特异性抗免疫球蛋白二级工具 是α单域抗体,也被称为纳米抗体®(Ablynx商标)。只有大约15 kD,它们比传统的免疫球蛋白小10倍。由于纳米抗体是一价的,它们可直接与初级抗体孵化,而不形成无功能群集。除了在免疫荧光染色上可以节省时间,FluoTags®使得研究人员能够用传统二级抗体无法达到的准确度和质量进行创新的应用。